双抗药物得益于适应症范围的扩大、良好的临床效果和安全性，其全球市场规模持续扩张，从初期约为1亿美元，到2019年迅速攀升至17亿美元。双抗市场规模预计到2030年将达到807亿美元，年均复合增长率为39.6%。

火热的双抗市场，亟待高效的生物工艺来加快研发进程，而定点整合技术将未知、盲目、重复的双抗工艺开发流程变为确定、精准、高效，可有效解决双抗制药成本高、产能低，周期长等难题，成为了Pfizer、Genentech等各大跨国药企巨头争相追捧的对象。一些双抗开发药企则在观望定点整合技术是否真的能成为中流砥柱，扛起重任呢？是否有真实的项目案例，来验证定点整合技术赋能双抗开发可行呢？

真实应用定点整合技术开发双抗的项目案例，它来了！我们对大湾生物智能化定点整合细胞株开发平台AlfaCell的1个项目案例，进行了全流程的剖析，详解平台是如何借助定点整合技术，一步一步解决双抗开发难题，实现质的飞跃的。

▲四链两价双抗项目案例

案例为1个四链两价的双抗，其产品现状是总产量仅为3.2g/L且不完整抗体比例为45%，达不到后续工作预期。项目期望能实现3个关键点：

项目期望

1. 3个月内交付稳定的单克隆细胞株；

2. 产量提升60%；

3. 后续纯化步骤、成本降低、生产扩大容易、质量品质易控管。

期望周期短、产量高、且便于后续工艺开展，是真敢想。大湾生物AlfaCell平台项目组对该双抗项目进行了深入构思，并提出了针对性的解决方案：

解决方案

1. 根据分子情况，选择最优信号肽；

2. 通过质粒设计，降低错配率、提高目标产物产量；

3. 运用AlfaCell细胞池的均一性特征，在cell pool阶段确认最佳质粒设计，无需到单克隆；

4. 基于定点整合细胞株及大湾生物位点优异性，完成所有构思。

▲项目解决方案流程图

分子设计阶段

根据产品情况，在GBB AI-信号肽数据库中筛选适合的信号肽，用瞬转方法确认4种质粒设计方案。

▲四种分子设计的质粒图

细胞池阶段

根据四种分子构型的TOP3细胞池在14天补料培养的表达量情况，选择表现更佳的细胞池。再将这些细胞池进行目标产物的含量、纯度的验证。

▲四种分子设计的TOP3细胞池的表达量情况（14天补料培养）

根据SDS-PAGE电泳结果，各TOP1细胞池的目标产物（LHHL）的含量比例，选择目标产物含量最高的L1L2H1H2细胞池进行单克隆挑选。

▲各TOP1细胞池的目标产物的表达量

单克隆阶段

根据14天补料培养的结果，选择单体产物表达量最高的。L1L2H1H2细胞池中TOP1单克隆的单体产物表达为5230.1mg/L，其在多种产物中含量为87.95%，计算得错配率在12.05%。

▲L1L2H1H2型的各单克隆表达量（14天补料培养）

▲各单克隆SEC色谱图

交付结果颇为可喜，顺利完成了周期短、产量高、且便于后续工艺开展的期望：

项目交付

1. 单克隆总产量为 5946.7 mg/L，相比提升85.8%；

2. 不完整抗体比例为12.05%，相比降低了72.2%；

3. 基于AlfaCell细胞池的均一性，提前预知产品质量；

4. 客户提前3个月进行药效试验、纯化工艺及检测方法开发。

项目流程中，定点整合技术所提供的均一细胞池起到了非常关键的作用。根据均一细胞池，我们不仅省去了多轮重复筛选工作，而且实现了提前预知产量的突破。不同种类产品的细胞池与单克隆的表现是一致的。

▲不同种类产品细胞池vs单克隆（14天补料培养）

▲细胞池扩大培养各个阶段的对比（14天补料培养）

总之，定点整合技术能够成为双抗新赛道上炙手可热的创新技术，是与其解决双抗开发成本高、产能低，周期长等难题是密不可分的。本次我们对大湾生物AlfaCell应用于四链两价的双抗项目案例进行了全流程剖析详解，也印证了定点整合技术对双抗确实有着重要的现实作用。当然，案例不仅仅只有这1个，不同类型的双抗开发项目都有不同程度的提升。我们期待定点整合技术能够解决更多国内外双抗药企的难题，为生命健康贡献更大的力量。

▲大湾生物AlfaCell平台赋能各类双抗开发项目案例

Pfizer、Genentech等各家大厂在今年BPI US West报告所讲的定点整合技术，颇为精彩。我们系统整理了现场报告的第一手视频资料，获得了众多读者的反馈，感兴趣的同仁可以扫描下方的二维码获取。

▲BPI US West 2024展会数十场头部药企的第一手报告

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